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武汉科斯坦生物科技有限公司
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代谢组学
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抗体/蛋白
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化合物单体
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浏览量:
产品名称:
JM 109 Competent Cell
NO.
029
货号:
CSKT107L
中文名称
JM 109 Competent Cell
英文名词
JM 109 Competent Cell
CAS号
产品货号:
CSKT107L
货期:
现货
价格与订购:
360.00
数量:
-
+
库存:
5
产品信息
如何订购
产品规格
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Cat No:CSKT107L (100μl×200支)
pUC19(control vector): 100pg/μl 5 μl
保存条件: -80℃
保质期: 6个月
基因型icon
endA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 supE44 hsdR17 (rK-,mK+) Δ(lac - proAB)/F' [ traD36 proAB+ laqIq lacZΔM15]
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产品说明icon
JM 109感受态细胞recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。携带hsdR17基因型背景,使得异源DNA不被内源核酸酶系统降解。lacZΔM15的存在使JM 109可用于构建克隆,蓝白斑筛选实验。JM 109感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达108cfu/μg DNA。
操作方法
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一 、热激转化法
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中,加入质粒或连接产物,轻轻混匀,冰浴30分钟。
2. 42℃水浴热激60秒,迅速放回冰中并静置2分钟,该过程不要摇动摇菌管。
3. 向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4. 根据实验要求(质粒,重组连接产物转化),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收,倒置平板,37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
二 、10分钟快速转化法
注:在使用卡那霉素,四环素等作为筛选抗性时,需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率,当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时,该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基,在37℃ 180rpm孵育1小时,然后转移到37℃预热的LB培养基上。
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. JM 109感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置5分钟。
3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上,涂均匀,表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
注意事项icon
1. 刚刚化冻的细胞,转化效率最高。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 重组产物不建议用10分钟快速转化法。
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Note
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For research use only .
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BL21(DE3) Chemically Competent Cell
人角膜上皮细胞(TPH104)
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