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  • 产品名称: 人角膜上皮细胞(TPH104)
  • 产品货号: TPH104
  • 货期: 现货
  • 价格与订购: 8000
  • 数量:
    库存: 5
  • 规格: T25瓶
  • 产品信息
  • 如何订购
    细胞简介
    人角膜上皮细胞分离自眼角膜组织;角膜位于眼球前壁的一层透明膜,约占纤维膜的前1/6,从后面看角膜呈正圆形,从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同,中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢,如有外物接触角膜,眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明,角膜并没有血管,透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层,由前向后依次为:上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。其主要功能如下:①角膜是唯一的无血管的组织,具有透明的特性和合成许多蛋白的功能,分三层细胞层,外层即是上皮细胞;②角膜上皮细胞能参与先天性免疫,能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统;③角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段,常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。
    方法简介
    人角膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10 cells/瓶。
    基本信息
    组织来源:眼角膜组织
    包装规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
    细胞形态:上皮细胞样
    推荐换液:2~3次/周
    生长特性:贴壁生长
    推荐传代:1:2
    包被条件:鼠尾胶原Ⅰ(2-5ug/cm2)
    消化液:0.25%胰蛋白酶
    培养保存
    培养体系:人角膜上皮细胞专用培养基(TPHM104)培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%;温度:37℃
    细胞消化
    1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
    2.添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆
    盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37°℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
    3.用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全
    培养基至5mL,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;4.待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
    细胞实验
    因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻瑶爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,
    避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原l(2-5ug/cm2),多聚赖氨酸PLL (0.1mg/ml) ,明胶(0.1%),依据细胞种类
    质检结果
    人角膜上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
    注意事项
    1.收到常温细胞后,请检查产品包装状况,若发现破损、溢出及污染,请及时联系我们。
    2.先不打开培养瓶盖,用75%酒精处理培养瓶表面,如果是贴壁细胞,请在培养箱中静置2-3小时(根据细胞密度状况决定)用来稳定细胞状态。
    如果是悬浮细胞则不需要静置,直接按照悬浮细胞步骤操作。
    3.静置完成后,在显微镜下确认细胞生长状态并拍照记录。(照片能有效帮助我们提供售后服务)
    4.细胞培养过程中如有异常状况,欢迎进行技术交流。
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    Note
    For research use only.