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- 产品名称： BL21(DE3) Chemically Competent Cell
- 产品货号： CSKT104L
- 货期： 现货
- 价格与订购： 360
- 数量：
库存： 5
- 规格： 200×100ul
- 产品信息
- 如何订购
产品规格
Cat No. CSKT104L （100μl×200支）
pUC19(control vector): 100pg/μl 5 μl
保存条件：-80℃
保质期： 6个月
基因型
F– ompT hsdS(rB–mB–) gal dcm(DE3)
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产品说明
BL 21(DE3)感受态细胞用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于BL21的染色体上。适合于非毒性蛋白的表达。BL 21(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达106 ~107cfu/μg DNA。
操作方法
一 、热激转化法
1.从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后，吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管 中，加入质粒或连接产物，轻轻混匀，冰浴30分钟。
2.42℃水浴热激60秒，迅速放回冰中并静置2分钟，该过程不要摇动摇菌管。
3.向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB（SOC培养基可提高2-3倍转化效率），37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4.根据实验要求（质粒），吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收，倒置平板，37℃过夜。
二、10分钟快速转化法
注：在使用卡那霉素，四环素等作为筛选抗性时，需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率，当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时，该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基，在37℃ 180rpm孵育1小时，然后转移到37℃预热的LB培养基上
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. BL 21(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质 粒）并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置5分钟。
3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水 渍。锚点
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1. 刚刚化冻的细胞，转化效率最高。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 重组产物不建议用10分钟快速转化法。
6. 表达感受态不建议用于重组连接产物转化。
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Note
For research use only .
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