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  • 产品名称: BL21(DE3) Chemically Competent Cell
  • 产品货号: CSKT104L
  • 货期: 现货
  • 价格与订购: 360
  • 数量:
    库存: 5
  • 规格: 200×100ul
  • 产品信息
  • 如何订购
    产品规格
    Cat  No.  CSKT104L   (100μl×200支)
    pUC19(control vector):  100pg/μl     5 μl
    保存条件:-80℃ 
    保质期: 6个月
    基因型
    F– ompT hsdS(rB–mB–) gal dcm(DE3)
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    产品说明
    BL 21(DE3)感受态细胞用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,该区整合于BL21的染色体上。适合于非毒性蛋白的表达。BL 21(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达106 ~107cfu/μg DNA。
    操作方法
    一 、热激转化法
    1.从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管 中,加入质粒或连接产物,轻轻混匀,冰浴30分钟。
    2.42℃水浴热激60秒,迅速放回冰中并静置2分钟,该过程不要摇动摇菌管。
    3.向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
    4.根据实验要求(质粒),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收,倒置平板,37℃过夜。
     二、10分钟快速转化法                             
    注:在使用卡那霉素,四环素等作为筛选抗性时,需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率,当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时,该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基,在37℃ 180rpm孵育1小时,然后转移到37℃预热的LB培养基上
    1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
    2. BL 21(DE3)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质      粒)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置5分钟。
    3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上,涂均匀,表面无水        渍。锚点
    4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
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    注意事项
    1. 刚刚化冻的细胞,转化效率最高。 
    2. 避免反复化冻。 
    3. 避免移液枪吹吸。
    4. 整个操作过程要轻柔。
    5. 重组产物不建议用10分钟快速转化法。
    6. 表达感受态不建议用于重组连接产物转化。
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    Note
    For research use only .