![]() |
Amily |
![]() |
Emily |
![]() |
Lily |
武汉科斯坦生物科技有限公司
-
在线咨询
-
官方邮箱
-
微信下单
-
回到顶部
代谢组学
科研服务
抗体/蛋白
地 址:武汉市东湖新技术开发区高新大道666号,武汉
国家生物产业基地B、C、D区研发楼C1栋
产品销售:15926423062
技术服务:18971263062
E - mail :info@chemstan.com
邮 编:430075
化合物单体
科斯坦生物(Chemstan)所有产品和服务仅用于科学研究,不为任何个人或者非科研性质的用途提供产品和服务。
Copyright @ 武汉科斯坦生物科技有限公司.All rights reserved
网站建设:中企动力武汉鄂ICP备19006850号-1
浏览量:
产品名称:
Top10 Chemically Competent Cell
NO.
027
货号:
CSKT103L
中文名称
Top10 Chemically Competent Cell
英文名词
Top10 Chemically Competent Cell
CAS号
产品货号:
CSKT103L
货期:
现货
价格与订购:
360.00
数量:
-
+
库存:
5
产品信息
如何订购
产品规格
icon
icon
Cat No. CSKT103L(100μl×200支)
pUC19(control vector): 100pg/μl 5 μl
保存条件:-80℃
保质期:6个月
基因型icon
F-mcrA △(mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZ△M15 △lac X74 recA1 ara△139 △(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (StrR ) endA1 nupG
icon
icon
产品说明icon
本品是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。本品使用pUC19质粒检测,转化效率可达108cfu/μg DNA,广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。可用于构建克隆,蓝白斑筛选等,具有链霉素抗性
操作方法
icon
icon
一 、热激转化法
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中,加入 质粒或连接产物,轻轻混匀,冰浴30分钟。
2. 42℃水浴热激60秒,迅速放回冰中并静置2分钟,该过程不要摇动摇菌管。
3. 向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4. 根据实验要求(质粒,重组连接产物转化),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收,倒置平板,37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
二、10分钟快速转化法
注:在使用卡那霉素,四环素等作为筛选抗性时,需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率,当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时,该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基,在37℃ 180rpm孵育1小时,然后转移到37℃预热的LB培养基上。
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. Top10感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置5分钟。
3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上,涂均匀,表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
注意事项icon
1. 刚刚化冻的细胞,转化效率最高。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 重组产物不建议用10分钟快速转化法。
iconicon
iconicon
Note
icon
icon
For research use only .
上一篇
Stbl3 Competent Cell
BL21(DE3) Chemically Competent Cell
下一篇