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浏览量:
产品名称：
Top10 Chemically Competent Cell
NO.
027
货号：
CSKT103L
中文名称
Top10 Chemically Competent Cell
英文名词
Top10 Chemically Competent Cell
CAS号
产品货号：
CSKT103L
货期：
现货
价格与订购：
360.00
数量：
-
+
库存：
5
产品信息
如何订购
产品规格
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Cat No. CSKT103L（100μl×200支）
pUC19(control vector): 100pg/μl 5 μl
保存条件：-80℃
保质期：6个月
基因型icon
F-mcrA △(mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZ△M15 △lac X74 recA1 ara△139 △(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (StrR ) endA1 nupG
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产品说明icon
本品是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本品使用pUC19质粒检测，转化效率可达108cfu/μg DNA，广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等，具有链霉素抗性
操作方法
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一 、热激转化法
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后，吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中，加入 质粒或连接产物，轻轻混匀，冰浴30分钟。
2. 42℃水浴热激60秒，迅速放回冰中并静置2分钟，该过程不要摇动摇菌管。
3. 向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB（SOC培养基可提高2-3倍转化效率），37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4. 根据实验要求（质粒，重组连接产物转化），吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收，倒置平板，37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
二、10分钟快速转化法
注：在使用卡那霉素，四环素等作为筛选抗性时，需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率，当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时，该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基，在37℃ 180rpm孵育1小时，然后转移到37℃预热的LB培养基上。
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. Top10感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置5分钟。
3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
注意事项icon
1. 刚刚化冻的细胞，转化效率最高。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 重组产物不建议用10分钟快速转化法。
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Note
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For research use only .
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