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产品名称： Human COVID-19 Nucleocapsid (NP) IgG ELISA检测试剂盒
产品货号： CSK00015
货期：现货
价格与订购： 2880
数量：

库存： 100
规格：

产品信息
如何订购

产品名称（Product Name）

Human COVID-19 Nucleocapsid (NP) IgG ELISA检测试剂盒

货号（Catalog#）

CSK00015

产品描述（Description）

本试剂盒采用间接ELISA分析技术，将N蛋白预先包被在酶标板上，之后将阳性对照样本和分析样本分别加入到微孔中，样本中N蛋白抗体会和预包被的N蛋白结合，清洗掉未结合的物质，再加入生物素标记的羊抗人二抗，清洗掉未结合的抗体，再加入HRP标记的链酶亲和素，清洗掉未结合的酶，将显色底物溶液添加到微孔中显色，显色强度与样品中N蛋白抗体浓度成正比。

本试剂盒用于测定血清和血浆中N蛋白抗体的浓度。

稳定性&储存（Stability &Storage）

收到试剂盒后请将阳性对照、检测溶液A、检测溶液B以及预包板保存于-20℃，封板膜放置于常温保存,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。

试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。

运输方式（Shipping）

蓝冰运输

使用方法（Standard Operating Procedure）

所需设备及试剂

450 nm滤光片酶标仪，含540 nm或570nm校正波长更佳

单道或多道微量移液器，移液器枪头

去离子水

500 mL量筒

样品稀释管或不同规格EP管

吸水纸

一、样品收集和储存

1）血清样本：全血室温放置60分钟或4℃过夜，然后1000 x g离心15分钟，取上清检测，或分装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。

2）血浆：使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆，样品采集后30分钟内1000 x g离心15分钟，取上清检测，或分装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。

二、试剂准备

使用前将所有试剂和标本置于室温平衡。

1.浓缩清洗液: 如果浓缩液中有晶体析出，加热至室温并轻轻混合，直到晶体完全溶解，25mL浓缩清洗液使用离子水定容至500mL，得到清洗工作液。

2.阳性对照标准点配置，阳性对照浓度为1mg/mL, 使用样本稀释液1:10000稀释阳性对照得到第一个标准点100ng/mL，依次进行倍比稀释操作得到共计7个标准点50 ng/mL、25 ng/mL、12.5 ng/mL、6.25 ng/mL、3.125ng/mL、1.5625ng/mL、最后再以100ul样本稀释液为零标准（0 ng/mL），共计8个标准点，建议每个标准点至少做2个平行孔。

3.血清，血浆样本配置：使用样本稀释液1:1000稀释后上样。

4.检测溶液A工作液配置，震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，临用前取合适体积用检测溶液稀释液1:1000稀释至工作浓度。

5.检测溶液B工作液配置，震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，临用前取合适体积用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。

6.显色液: 避光保存，显色时100μL /孔。

7.终止液：显色完毕后50μL /孔。

三、实验步骤

使用前将所有试剂和样品置于室温。建议对所有标准品、对照品和样品进行一式两份的分析。

1. 按照前面章节的指示准备所有试剂和准备工作。

2. 从板架上取下多余的微孔板条，将其放回装有干燥剂包的箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。

3. 每孔加入100μL 阳性对照（共计8点）和待测样本，用封板膜封住，37℃孵育60分钟。

4. 弃去孔内液体，每孔加入 300μL的清洗液清洗，轻微震荡后弃去孔内液体，将酶标板倒扣在吸水纸上轻拍，使残留在孔内的液体全部去除，重复洗板 3 次，此过程也可采用尖嘴喷射瓶，多道移液器或自动洗板机来完成。

5. 每孔加入100μL检测溶液A工作液（生物素标记），用新的封板膜封住，37℃孵育30分钟。

6. 重复步骤4中的洗板程序。

7. 每孔加入100μL检测溶液B工作液（HRP标记），用新的封板膜封住。37℃孵育30分钟。

8. 重复步骤4中的洗板程序。

9. 每孔加入100μL显色液，37℃避光显色10分钟。

10. 每孔加入50μL终止液，孔里的颜色应该由蓝色变至黄色，如果孔内颜色为绿色或颜色变化不均匀，轻轻震动酶标板板使颜色均一。

11. 擦干酶标板底部水气，立刻用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度值（O.D.值），如果波长校正可用，则设置为540 nm或570 nm，如果波长校正不可用，则从450 nm的读数中减去540 nm或570 nm的读数，这种修正可去除酶标板读数中的光学偏差，如果没有校正波长，可直接读取450 nm的读数，但读值有可能会更高、更不准确。

四、标准曲线制作

取每个阳性对照和样本的复孔平均值O.D.，减去零标准孔平均值O.D.后，以阳性对照的浓度为横坐标，O.D.值为纵坐标，绘出标准曲线（R2值越趋近于1曲线越精确），然后再将样品的平均值O.D.带入标准曲线的回归方程式，计算出样品中目标蛋白浓度。

如果样品已经稀释，从标准曲线上算出的浓度须乘以稀释系数，即为样品的实际浓度。

五、精密度

批内差： CV<12%

批间差： CV<15%

六、稳定性

试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。

七、实验细节说明

1. 在试剂盒标签上的有效期内使用，不要与其他厂家的试剂盒混合使用。

2. 如果样本检测值超出标准曲线范围，可使用适当的稀释液稀释样品并重新测定，或预估样品中抗体浓度，在实验之前预先稀释数个梯度同时进行测定。

3. 为避免交叉污染，不同标准品、样品、试剂的加样需更换移液枪头，每管试剂使用单独的容器储存。

4. 在孵育过程中贴紧封板膜。

5. 显色液避光保存，临用前15分钟从冰箱取出在室温平衡。

6. 浓缩清洗液（20×）需使用去离子水1：20稀释至工作浓度，去离子水不包含在试剂盒中，需实验人员自备。

7. 终止液为酸性溶液，具有轻微腐蚀性，使用时避免接触皮肤、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接触，使用大量清水冲洗后观察接触部位反应，如情节严重请及时就医。

8. 试剂盒酶标板条可按需拆卸使用，已开封的试剂盒建议在1个月内使用，未开封的试剂盒以包装盒上保质期为准。

组分和说明（Component and Instruction）

样品清单及储存条件

样品名称	规格	描述	推荐储存条件
N蛋白预包板	1 板	96孔聚苯乙烯微孔板（12条*8孔），预包被N蛋白。	密封状态放置于-20℃保存。
浓缩清洗液	1 瓶	25 mL （20×）浓度的清洗液（含防腐剂），临用前用去离子水1:20稀释至工作浓度。	放置于4℃ 保存。
阳性对照	1瓶	12μL重组人源N蛋白抗体，浓度1mg/mL。	放置于-20℃ 保存。
检测溶液A	1 瓶	12μL 生物素标记的羊抗人二抗，临用前用检测溶液稀释液1:1000稀释至工作浓度。	放置于-20℃ 保存。
检测溶液B	1 瓶	12μL HRP标记的链酶亲和素，临用前用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。	放置于-20℃ 保存。
样本稀释液	1 瓶	25 mL稀释液（含防腐剂），用于阳性对照、血清、血浆的稀释。	放置于4℃ 保存。
检测溶液稀释液	1 瓶	25 mL稀释液（含防腐剂），用于检测溶液A，检测溶液B的稀释。	放置于4℃ 保存。
显色液	1 瓶	12 mL TMB（四甲基联苯胺）。	放置于4℃ 保存。
终止液	1 瓶	6 mL 2M 酸液。	放置于4℃ 保存。
封板膜	4 片	用于实验中封闭酶标板。	放置于常温保存。

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Note

For research use only .