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  • 产品名称: SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Protein检测试剂盒
  • 产品货号: CSK00013
  • 货期: 现货
  • 价格与订购: 2880
  • 数量:
    库存: 100
  • 规格:
  • 产品信息
  • 如何订购
    产品名称(Product Name)
    SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Protein检测试剂盒
    货号(Catalog#)
    CSK00013
    产品描述(Description)
    本试剂盒采用双抗夹心ELISA定量分析技术,将抗Nucleocapsid蛋白兔多克隆抗体预先包被在酶标板上,之后将标准品或分析样本加入到微孔中,样本中Nucleocapsid蛋白会被预包被的抗体捕获,清洗掉未结合的物质后,将生物素标记的抗Nucleocapsid蛋白单克隆抗体加入到微孔中反应,形成夹心复合物,再加入HRP标记的链霉亲和素,清洗掉未结合的抗体及酶试剂之后,将显色液添加到微孔中显色,显色强度与样品中Nucleocapsid蛋白浓度成正比。
    本试剂盒用于测定支气管肺泡灌洗液、鼻咽拭子样本或重组表达样本中Nucleocapsid蛋白的浓度。
    稳定性&储存(Stability &Storage)
    收到试剂盒后请将标准品、检测溶液 A、检测溶液 B 以及预包板保存于-20℃,封板膜放置于常温保存,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。
    试剂盒按推荐温度保存6个月,信号强度降低小于 10%。
    运输方式(Shipping)
    蓝冰运输
    使用方法(Standard Operating Procedure)
    所需设备及试剂
    450 nm滤光片酶标仪,含540 nm或570nm校正波长更佳
    单道或多道微量移液器,移液器枪头
    去离子水
    500 mL量筒
    样品稀释管或不同规格EP管
    吸水纸
     
    一、试剂准备
    使用前将所有试剂和样本置于室温平衡。
    1. 20×浓缩清洗液:如果浓缩清洗液中有晶体析出,平衡至室温并摇匀,直到晶体完全溶解,25mL浓缩清洗液使用去离子水定容至500mL,得到清洗液。
    2. 用2mL标准品/样本稀释液溶解Nucleocapsid蛋白标准品冻干粉,溶解后标准品浓度为80ng/mL。轻轻混匀后静置10分钟,然后进行标准品的稀释, 准备 7 个稀释标准品的 EP 管,每个 EP 管中加入500μL的标准品稀释液,依次倍比稀释成 80ng/mL、 40ng/mL、20ng/mL、 10ng/mL、 5ng/mL、2.5 ng/mL、 1.25ng/mL, 标准品/样本稀释液(0ng/mL)直接作为空白孔。
    3. 检测溶液A(生物素标记):临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心,使液体集中于管底,使用检测溶液稀释液1:100稀释至工作浓度。
    4. 检测溶液B(HRP标记):临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心,使液体集中于管底,使用检测溶液稀释液1:100稀释至工作浓度。
    5. 显色液:避光保存,显色时100μL /孔。
    6. 终止液:显色完毕后50μL /孔。
     
    二、实验步骤
    使用前将所有试剂和样本置于室温,建议对所有标准品、对照品和样本进行一式两份的分析。
    1. 按照前面章节的指示准备所有试剂和样本。
    2. 从板架上取下多余的微孔板条,将其放回装有干燥剂包的铝箔袋中,然后重新密封保存于-20℃。
    3. 每孔加入100μL标准品或样本,用封板膜封住,37℃孵育60分钟。
    4. 弃去孔内液体,每孔加入 300μL的清洗液,轻微震荡后弃去孔内液体,将酶标板倒扣在吸水纸上轻拍,使残留在孔内的液体全部去除,重复洗板 3 次,此过程也可采用尖嘴喷射瓶,多道移液器或自动洗板机来完成。
    5. 每孔加入100μL检测溶液A(生物素标记),用新的封板膜封住,37℃孵育30分钟。
    6. 重复步骤4中的洗板程序。
    7. 每孔加入100μL检测溶液B(HRP标记),用新的封板膜封住,37℃孵育30分钟。
    8. 重复步骤4中的洗板程序。
    9. 每孔加入100μL显色液,37℃避光显色5-10分钟。
    10. 每孔加入50μL终止液,孔里的颜色应该由蓝色变至黄色,如果孔内颜色为绿色或颜色变化不均匀,轻轻震动酶标板使颜色均一。
    11. 擦干酶标板底部水气,立刻用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的O.D.值,如果波长校正可用,则设置为540 nm或570 nm,如果波长校正不可用,则从450 nm的读数中减去540 nm或570 nm的读数,这种修正可去除酶标板读数中的光学偏差,如果没有校正波长,可直接读取450 nm的读数,但读值有可能不准确。
     
    三、标准曲线制作
    每个标准品和样本的复孔平均O.D.值,减去空白孔平均O.D.值后,以标准品的浓度为横坐标,O.D.值为纵坐标,绘出标准曲线(R2值越趋近于1曲线越精确),然后再将样本的平均O.D.值代入标准曲线的回归方程式,计算出样品浓度。
    如果样品已经稀释,从标准曲线上算出的浓度需乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
     
    四、标曲案例
    标准曲线仅用于演示,每次实验均需生成单独的标准曲线。

    五、检测范围
    1.25ng/mL—80ng/mL
     
    六、最低检测限(MDD)
    <1ng/mL
    MDD是测试20个零标准(标准品/样本稀释液)的平均O.D.值上加两倍标准差后计算相应的浓度来确定的。
     
    七、精密度
    批内差: CV<12%
    批间差: CV<15%
     
    八、稳定性
    试剂盒按推荐温度保存6个月,信号强度降低小于10%。
    组分和说明(Component and Instruction)

    样品清单及储存条件

    样品名称

    规格

    描述

    推荐储存条件

    预包板

    96孔聚苯乙烯微孔板(12*8孔),预包被抗Nucleocapsid蛋白兔多克隆抗体

    密封状态放置于-20℃保存

    标准品

    160ng重组Nucleocapsid蛋白冻干粉(含防腐剂),临用前复溶于2mL标准品/样本稀释液,终浓度为80ng/mL

    放置于-20℃保存

    检测溶液A

     

    120μL 生物素标记的抗Nucleocapsid蛋白单克隆抗体(含防腐剂),临用前用检测溶液稀释液1:100稀释至工作浓度

    放置于-20℃保存

    检测溶液B

     

    120μL HRP标记的链酶亲和素(含防腐剂),临用前用检测溶液稀释液1:100稀释至工作浓度

    放置于-20℃保存

    标准品/样本稀释液

    25 mL稀释液(含防腐剂),用于标准品、待测样本的稀释

    放置于4℃保存

    检测溶液稀释液

    25 mL稀释液(含防腐剂),用于检测溶液A和检测溶液B的稀释

    放置于4℃保存

    浓缩清洗液

    25 mL 20×)浓缩清洗液(含防腐剂),临用前用去离子水1:20稀释至工作浓度

    放置于4℃保存

    显色液

    12 mL TMB(四甲基联苯胺)

    放置于4℃保存

    终止液

    6 mL

    放置于4℃保存

    封板膜

    用于实验中封闭酶标板

    放置于常温保存

    在试剂盒保质期内使用

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    Note
    For research use only .