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浏览量:
产品名称：
SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K,K417T,N501Y)
NO.
003
货号：
CSK00019
中文名称
新冠相关试剂盒
英文名词
SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K,K417T,N501Y)
CAS号
/
产品货号：
CSK00019
货期：
现货
价格与订购：
2880.00
数量：
-
+
库存：
100
产品信息
如何订购
产品名称（Product Name）icon
SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K,K417T,N501Y)
货号（Catalog#）icon
CSK00019
产品描述（Description）icon
SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K,K417T,N501Y)基于中和抗体ELISA检测的原理，可以检测血清或血浆中抗SARS-CoV-2病毒的中和抗体浓度，这种抗体可以阻断RBD(E484K,K417T,N501Y)和ACE2之间的相互作用，该试剂盒包含两个关键成分：HRP标记的重组人ACE2蛋白和SARS-CoV-2病毒RBD(E484K,K417T,N501Y)蛋白。
本试剂盒用于测定血清或血浆样本 RBD(E484K,K417T,N501Y)中和抗体的浓度。
稳定性&储存（Stability &Storage）icon
收到试剂盒后请将阳性对照、阴性对照、检测溶液 A 以及预包板保存于-20℃，封板膜放置于常温保存,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。
试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。
运输方式（Shipping）icon
蓝冰运输
使用方法（Standard Operating Procedure）icon
所需设备及试剂
450 nm滤光片酶标仪，含540 nm或570nm校正波长更佳
单道或多道微量移液器，移液器枪头
去离子水
500 mL量筒
样品稀释管或不同规格EP管
吸水纸
一、样品收集与储存
处理所有的血液和血清，请按照NCCLS提供的处理和储存血清和血浆样本的建议（1990年H18-A批准的血液样本处理和处理标准程序）。
血清样本：全血室温放置60分钟或4℃过夜，然后1000 x g离心15分钟，取上清检测，或分装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。
血浆：使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆，样品采集后30分钟内1000 x g离心15分钟，取上清检测，或分装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。
二、试剂准备
使用前将所有试剂和样本置于室温平衡。
20×浓缩清洗液：如果浓缩清洗液中有晶体析出，平衡至室温并摇匀，直到晶体完全溶解，25mL浓缩清洗液使用去离子水定容至500mL，得到清洗液。
待测样本：将待测样本用样本稀释液按照体积比1:9稀释，例如10μL样本加入90μL样本稀释液。
阳性对照：临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，使用样本稀释液1:100稀释至工作浓度。
阴性对照：临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，使用样本稀释液1:10稀释至工作浓度。
检测溶液A（HRP标记）：临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，使用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。
显色液：避光保存，显色时100μL /孔。室温下孵育8〜10分钟。
终止液：显色完毕后50μL /孔。
三、实验步骤
使用前将所有试剂和样本置于室温，建议对所有标准品、对照品和样本进行一式两份的分析。
1. 按照前面章节的指示准备所有试剂和样本。
2. 从板架上取下多余的微孔板条，将其放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
3. 将稀释的阳性对照、阴性对照和待测样本分别与检测溶液A按照 1:1等体积混合。例如，将100μL阳性对照与100μL检测溶液A混合，该步骤可在96孔PCR板或者96孔Elisa板中进行。
4. 将阳性对照混合物、阴性对照混合物和待测样本混合物各100µL添加到对应的酶标板孔中，用封板膜盖好，37℃孵育1小时。
5. 弃去孔内液体，每孔加入 300μL的清洗液，轻微震荡后弃去孔内液体，将酶标板倒扣在吸水纸上轻拍，使残留在孔内的液体全部去除，重复洗板 5 次，此过程也可采用尖嘴喷射瓶，多道移液器或自动洗板机来完成。
6. 每孔加入100μL显色液，37℃避光显色8-10分钟。
7. 每孔加入50μL终止液，孔里的颜色应该由蓝色变至黄色，如果孔内颜色为绿色或颜色变化不均匀，轻轻震动酶标板使颜色均一。
8. 擦干酶标板底部水气，立刻用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的O.D.值，如果波长校正可用，则设置为540 nm或570 nm，如果波长校正不可用，则从450 nm的读数中减去540 nm或570 nm的读数，这种修正可去除酶标板读数中的光学偏差，如果没有校正波长，可直接读取450 nm的读数，但读值有可能不准确。
四、结果判读
为确保结果的有效性，每次检测必须包括阳性和阴性对照，阳性对照和阴性对照检测OD450必须在下表所列的范围内，如果OD450值不符合下表要求，则试验无效，必须重复进行。
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项目 |
OD450值 |
结果判断 |
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阳性对照 |
＜ 0.3 |
通过 |
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阴性对照 |
＞0.9 |
通过 |
用抑制率来判定样本中抗SARS-CoV-2中和抗体的水平，判定公式如下：
五、判定阈值
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项目 |
阈值 |
结果 |
检测结果判读 |
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中和抗体检测 |
≥20% |
阳性 |
检测到中和抗体 |
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＜20% |
阴性 |
未检测到中和抗体 |
六、精密度
批内差：CV<8%
批间差：CV<10%
七、稳定性
试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。
八、实验细节说明
1. 在试剂盒标签上的有效期内使用，不要与其他厂家的试剂盒混合使用。
2. 如果阴性对照或阳性对照检测OD值超出检测范围，可适当缩短显色时间。
3. 为避免交叉污染，不同标准品、样本、试剂的加样需更换移液枪头，每管试剂使用单独的容器储存。
4. 在孵育过程中贴紧封板膜。
5. 显色液避光保存，临用前15分钟从冰箱取出室温平衡。
6. 浓缩清洗液（20×）需使用去离子水1：20稀释至工作浓度，去离子水不包含在试剂盒中，需实验人员自备。
7. 终止液为酸性溶液，具有轻微腐蚀性，使用时避免接触皮肤、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接触，使用大量清水冲洗后观察接触部位反应，如情节严重请及时就医。
8. 试剂盒酶标板条可按需拆卸使用，已开封的试剂盒建议在1个月内使用，未开封的试剂盒所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存，收到试剂盒后请将阴性对照、阳性对照、检测溶液 A以及 96 孔板保存于-20℃，其余试剂请置于 4 ℃保存备用。
九、常见问题解决指南
| 问题 |
可能原因 |
解决方案 |
|
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阳性质控读数低或者异常 |
检测溶液A和预包板失活 |
a. |
增加反应时间或检测试剂浓度以补偿可能丧失的活性 |
|
仪器设置错误 |
a. a.
|
检查仪器设置 |
|
|
b. |
提前一小时预热酶标仪 |
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加样错误 |
a. |
检查加样步骤 |
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|
试剂过早提前准备 |
a. |
确保工作液现配现用 |
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|
温度不稳定
|
a. |
孵育时间和温度参见说明书，避免反复冻融
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|
|
读数背景高 |
样品中含有抑制剂
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a. |
加入空白孔 |
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b. |
保证DMSO < 1% |
||
|
洗涤不完全 |
a. |
增加洗涤次数和洗液量 |
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|
缓冲液样品污染、降解
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a. |
确保正确准备，使用和存储了缓冲液和样品
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|
读数不稳定 |
移液或稀释方法不一致 |
a. |
校正移液器
|
|
b.
|
准备预混液以减少移液不一致 |
||
|
c. |
设置平行孔以获得更准确的结果 |
||
|
孔中有气泡 |
a. |
轻震酶标板以去除气泡
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|
|
读数过高 |
a. |
调整样品浓度以达到最佳信号强度。
|
|
|
b. |
孵育时间调整至45分钟
|
||
|
试剂和样品混合不充分 |
a. |
确保试剂与样品完全混合
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|
|
显色不完全 |
缓冲液残留或污染
|
a. |
阴性对照中的颜色应在添加TMB底物后10秒钟内出现。 如未按上述时间显色可考虑以下情况： a.在添加TMB之前确保没有污染或残留的缓冲液 b.延长TMB孵育时间到15分钟 |
组分和说明（Component and Instruction）icon
icon
Noteicon
For research use only .
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