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  • 产品名称: SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit (N501Y)
  • 产品货号: CSK00017
  • 货期: 现货
  • 价格与订购: 2880
  • 数量:
    库存: 100
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  • 产品信息
  • 如何订购
    产品名称(Product Name)
    SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit (N501Y)
    货号(Catalog)
    CSK00017
    产品描述(Description)
    SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(N501Y)基于中和抗体ELISA检测的原理,可以检测血清或血浆中抗SARS-CoV-2病毒的中和抗体浓度,这种抗体可以阻断RBD(N501Y)和ACE2之间的相互作用,该试剂盒包含两个关键成分:HRP标记的重组人ACE2蛋白和SARS-CoV-2病毒RBD(N501Y)蛋白。
    本试剂盒用于测定血清或血浆样本 RBD(N501Y)中和抗体的浓度。
    稳定性&储存(Stability &Storage)
    收到试剂盒后请将阳性对照、阴性对照、检测溶液 A 以及预包板保存于-20℃,封板膜放置于常温保存,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。
    试剂盒按推荐温度保存6个月,信号强度降低小于 10%。
    运输方式(Shipping)
    蓝冰运输
    使用方法(Standard Operating Procedure)
    所需设备及试剂
    450 nm滤光片酶标仪,含540 nm或570nm校正波长更佳
    单道或多道微量移液器,移液器枪头
    去离子水
    500 mL量筒
    样品稀释管或不同规格EP管
    吸水纸
    一、样品收集与储存
    处理所有的血液和血清,请按照NCCLS提供的处理和储存血清和血浆样本的建议(1990年H18-A批准的血液样本处理和处理标准程序)。
    血清样本:全血室温放置60分钟或4℃过夜,然后1000 x g离心15分钟,取上清检测,或分装后于≤-20℃冰箱保存,避免样品反复冻融。
    血浆:使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆,样品采集后30分钟内1000 x g离心15分钟,取上清检测,或分装后于≤-20℃冰箱保存,避免样品反复冻融。
     
    二、试剂准备
    使用前将所有试剂和样本置于室温平衡。
    20×浓缩清洗液:如果浓缩清洗液中有晶体析出,平衡至室温并摇匀,直到晶体完全溶解,25mL浓缩清洗液使用去离子水定容至500mL,得到清洗液。
    待测样本:将待测样本用样本稀释液按照体积比1:9稀释,例如10μL样本加入90μL样本稀释液。
    阳性对照:临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心,使液体集中于管底,使用样本稀释液1:100稀释至工作浓度。
    阴性对照:临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心,使液体集中于管底,使用样本稀释液1:10稀释至工作浓度。
    检测溶液A(HRP标记):临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心,使液体集中于管底,使用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。
    显色液:避光保存,显色时100μL /孔。室温下孵育8〜10分钟。
    终止液:显色完毕后50μL /孔。
     
    三、实验步骤
    使用前将所有试剂和样本置于室温,建议对所有标准品、对照品和样本进行一式两份的分析。
    1. 按照前面章节的指示准备所有试剂和样本。
    2. 从板架上取下多余的微孔板条,将其放回装有干燥剂包的铝箔袋中,然后重新密封保存于-20℃。
    3. 将稀释的阳性对照、阴性对照和待测样本分别与检测溶液A按照 1:1等体积混合。例如,将100μL阳性对照与100μL检测溶液A混合,该步骤可在96孔PCR板或者96孔Elisa板中进行。
    4. 将阳性对照混合物、阴性对照混合物和待测样本混合物各100µL添加到对应的酶标板孔中,用封板膜盖好,37℃孵育1小时。
    5. 弃去孔内液体,每孔加入 300μL的清洗液,轻微震荡后弃去孔内液体,将酶标板倒扣在吸水纸上轻拍,使残留在孔内的液体全部去除,重复洗板 5 次,此过程也可采用尖嘴喷射瓶,多道移液器或自动洗板机来完成。
    6. 每孔加入100μL显色液,37℃避光显色8-10分钟。
    7. 每孔加入50μL终止液,孔里的颜色应该由蓝色变至黄色,如果孔内颜色为绿色或颜色变化不均匀,轻轻震动酶标板使颜色均一。
    8. 擦干酶标板底部水气,立刻用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的O.D.值,如果波长校正可用,则设置为540 nm或570 nm,如果波长校正不可用,则从450 nm的读数中减去540 nm或570 nm的读数,这种修正可去除酶标板读数中的光学偏差,如果没有校正波长,可直接读取450 nm的读数,但读值有可能不准确。
     
    四、结果判读
    为确保结果的有效性,每次检测必须包括阳性和阴性对照,阳性对照和阴性对照检测OD450必须在下表所列的范围内,如果OD450值不符合下表要求,则试验无效,必须重复进行。

    项目

    OD450

    结果判断

    阳性对照

     0.3

    通过

    阴性对照

    0.9

    通过

    用抑制率来判定样本中抗SARS-CoV-2中和抗体的水平,判定公式如下:

     

    五、判定阈值

    项目

    阈值

    结果

    检测结果判读

           中和抗体检测

    20%

    阳性

    检测到中和抗体

    20%

    阴性

    未检测到中和抗体

     

    六、精密度

    批内差:CV<8%

    批间差:CV<10%

     
    七、稳定性
    试剂盒按推荐温度保存6个月,信号强度降低小于 10%。
     
    八、实验细节说明
    1. 在试剂盒标签上的有效期内使用,不要与其他厂家的试剂盒混合使用。
    2. 如果阴性对照或阳性对照检测OD值超出检测范围,可适当缩短显色时间。
    3. 为避免交叉污染,不同标准品、样本、试剂的加样需更换移液枪头,每管试剂使用单独的容器储存。
    4. 在孵育过程中贴紧封板膜。
    5. 显色液避光保存,临用前15分钟从冰箱取出室温平衡。
    6. 浓缩清洗液(20×)需使用去离子水1:20稀释至工作浓度,去离子水不包含在试剂盒中,需实验人员自备。
    7. 终止液为酸性溶液,具有轻微腐蚀性,使用时避免接触皮肤、眼、耳、口等暴露部位,如不慎接触,使用大量清水冲洗后观察接触部位反应,如情节严重请及时就医。
    8. 试剂盒酶标板条可按需拆卸使用,已开封的试剂盒建议在1个月内使用,未开封的试剂盒所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存,收到试剂盒后请将阴性对照、阳性对照、检测溶液 A以及 96 孔板保存于-20℃,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。

     

    九、常见问题解决指南

    问题

    可能原因

    解决方案

    阳性质控读数低或者异常

    检测溶液A和预包板失活

    a.

    增加反应时间或检测试剂浓度以补偿可能丧失的活性

    仪器设置错误

    a.

    a.

     

    检查仪器设置

    b.

    提前一小时预热酶标仪

    加样错误

    a.

    检查加样步骤

    试剂过早提前准备

    a.

    确保工作液现配现用

    温度不稳定

     

    a.

    孵育时间和温度参见说明书,避免反复冻融

     

    读数背景高

    样品中含有抑制剂

     

    a.

    加入空白孔

    b.

    保证DMSO < 1%

    洗涤不完全

    a.

    增加洗涤次数和洗液量

    缓冲液样品污染、降解

     

    a.

    确保正确准备,使用和存储了缓冲液和样品

     

    读数不稳定

    移液或稀释方法不一致

    a.

    校正移液器

     

    b.

     

    准备预混液以减少移液不一致

    c.

    设置平行孔以获得更准确的结果

    孔中有气泡

    a.

    轻震酶标板以去除气泡

     

    读数过高

    a.

    调整样品浓度以达到最佳信号强度。

     

    b.

    孵育时间调整至45分钟

     

    试剂和样品混合不充分

    a.

    确保试剂与样品完全混合

     

    显色不完全

    缓冲液残留或污染

     

    a.

    阴性对照中的颜色应在添加TMB底物后10秒钟内出现。

    如未按上述时间显色可考虑以下情况:

    a.在添加TMB之前确保没有污染或残留的缓冲液

    b.延长TMB孵育时间到15分钟

     
    组分和说明(Component and Instruction)
     
    Note
    For research use only .