159-2642-3062 027-6531779
服务热线(工作日:9:00-17:30)

浏览量: 92

  • 产品名称: PNGase F
  • 产品货号: CSE00005
  • 货期: 现货
  • 价格与订购: 800
  • 数量:
    库存: 100
  • 规格: 15000U 75000U
  • 产品信息
  • 如何订购
    产品英文名(Product Name)
    PNGase F
    产品中文名
    肽N-糖苷酶;糖基肽酶
    CAS NO
    83534-39-8
    icon
    产品描述(Description)
    肽N-糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶,主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌。PNGase F可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖,及杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨残基之间的酰胺键,同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。
    PNGase F 不会去除常见植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 岩藻糖连接的寡糖。
    储存条件(Storage)
    储存于 -20°C,保质期 12 个月。
    运输方式(Shipping)
    蓝冰运输
    状态(Form)
    Liquid
    储存溶液(Buffer)
    20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol
    表达宿主(Host)
    E. coli
    分子量
    36kDa
    纯度
    >95% as determined by SDS-PAGE
    比活性
    1,800,000 U/mg
    酶活单位定义
    1个酶活力单位指在10ul的反应体系中,37℃条件下1小时从10ug变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量定义为一个活性单位(U)。
    酶切反应条件
    37℃ ,酶切反应1h,每1ug酶可以酶切10ug底物。icon
    实验示例(Experiment Example)
    使用方法(Standard Operating Procedure)
    1. 在变性条件下进行SDS-PAGE的蛋白质去糖基化
    (1) 在水中加入50μg目标糖蛋白(或低离子强度的相容缓冲液)至最终体积为12μl。
    (2) 加入1μl 的5%SDS。
    (3) 加入1μl的 1MDTT。
    (4) 在95℃加热5min使样品变性。
    (5) 在室温下冷却5min。
    (6) 加入2μl的0.5M磷酸钠缓冲液(pH 7.5)。如果pH在PNGase F(pH 6-10)范围内,可以使用其他缓冲液。   
    (7) 加入2μl的10%NP-40。可用Triton X-100替代NP-40。
    (8) 加入2μl的PNGase F.
    (9) 在37°C孵育1-3h。
    注意:糖蛋白的去糖基化可以通过SDS-PAGE上的凝胶移位来观察,去糖基化的产物比糖基化的底物移动的更快。
     
    2.  在非变性条件下进行质谱检测的蛋白质去糖基化
    (1) 在50mM碳酸氢铵(pH 7.8)中加入20μg的糖蛋白至终体积为18μl。
    (2) 加入2μl的PNGase F.
    (3) 在37°C孵育2-18h。
    注意:在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化,在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。
    Note
    For research use only .