159-2642-3062 027-6531779
服务热线(工作日:9:00-17:30)

浏览量: 5

  • 产品名称: DH 10β Chemically Competent Cell
  • 产品货号: CSKT102L
  • 货期: 现货
  • 价格与订购: 360
  • 数量:
    库存: 5
  • 规格: 200×100ul
  • 产品信息
  • 如何订购
    产品规格
    RAW264.7小鼠单核巨噬细胞
     基因型
    F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galE15 galK rpsL nupG λ- 
    icon
    产品说明
    DH 10β菌株来源于MC1061菌株,消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS的限制系统,使DH 10β感受态细胞适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA,允许构建更多具有代表性的基因组文库。recA1和endA1的突变有利于稳定和高纯度质粒DNA的提取。rpsL赋予其链霉素抗性,φ80lacZ∆M15 的存在使DH 10β可用于蓝白斑筛选。DH 10β感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg DNA。
     操作方法
    一 、热激转化法
    1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中,加入质粒或连接产物,轻轻混匀,冰浴30分钟。
    2. 42℃水浴热激60秒,迅速放回冰中并静置2分钟,该过程不要摇动摇菌管。
    3. 向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
    4. 根据实验要求(质粒,重组连接产物转化),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收,倒置平板,37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
    二 、10分钟快速转化法
    注:在使用卡那霉素,四环素等作为筛选抗性时,需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率,当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时,该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基,在37℃ 180rpm孵育1小时,然后转移到37℃预热的LB培养基上。
    1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
    2. DH 10β感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置5分钟。
    3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上,涂均匀,表面无水渍。
    4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
    iconiconicon
    注意事项
    1. 刚刚化冻的细胞,转化效率最高。
    2. 避免反复化冻。 
    3. 避免移液枪吹吸。
    4. 整个操作过程要轻柔。
    5. 重组产物不建议用10分钟快速转化法。
    iconicon
    iconicon
    Note
    For research use only .