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噬菌体展示--羊驼免疫纳米抗体文库定制

噬菌体展示--羊驼免疫纳米抗体文库定制

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抗体药物研发服务平台--羊驼免疫纳米抗体文库定制

一、服务简介

  纳米抗体(nanobody,Nb),即重链单域抗体VHH(variable domain of heavy chain of heavy

chainantibody),该类抗体只包含一个重链可变区(VHH)CH2CH3区,相比于其他抗体,轻链天然缺失。纳米抗体晶体直径2.5nm,长4m,是自然存在的可以和抗原结合的最小片段。

 

二、纳米抗体的应用

  纳米抗体能用于构建多重不同类型的分子结构,在医学诊断和治疗上实用性较高。例如可以构建成双功能抗体或双特异性抗体进行疾病的靶向治疗。通过基因改造,纳米抗体可以形成多聚体,大大提高了抗体与抗原的结合能力。通过基因工程形成纳米抗体融合蛋白可以带上酶或者毒素,融合蛋白在组织穿透,清除速度及稳定性上比普通抗体更有优势,可以用于低浓度抗原的检测。

 

三、科斯坦生物的优势

针对特定靶点的纳米抗体定制服务

科斯坦可以提供针对特定靶点的特异性纳米抗体定制服务,包括抗原检测,羊驼免疫,采血,效价检测,纳米抗体噬菌体库构建及淘选,特异性高亲和力纳米抗体筛选,表达,检测一条龙服务。亲和力可以达到10-8~10-10M级别。

 

四、案例展示

针对靶点B的特异性纳米抗体定制服务:

1. 靶点B免疫羊驼,进行四轮免疫后采血提取PBMC,经RNA提取,反转录获得cDNA后扩增获取VHH可变区片段

 

2.免疫羊驼纳米抗体库的构建:

将获得的VHH可变区片段连入噬菌体展示载体,电转宿主菌,最终获得库容为8.76*10^9纳米抗体库,插入正确率为100%

 

3.免疫羊驼纳米抗体库的淘选及筛选:

利用构建的免疫羊驼纳米抗体库,针对靶点B蛋白,完成三轮淘选,其淘选富集度如下:

 

筛选96个克隆,其中阳性克隆共94个,阳性率为97.9

 

排除重复序列,最终获得了7条不同的抗体序列。将这些抗体序列表达成可溶性的VHH抗体蛋白,进行再次验证,结果如下:

 

随机挑选两条抗体蛋白进行亲和力测定,结果如下:

R1P1-A10:KD:6.49E-09M

R1P1-H12:KD:1.52E-07M

五、咨询与订购

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